熒光免疫分析的原理

熒光免疫分析的原理

熒光免疫檢測技術(shù)具有專一性強(qiáng)、靈敏度高、實用性好等優(yōu)點，因此它被用于測量含量很低的生物活性化合物，例如蛋白質(zhì)（酶、接受體、抗體）、激素（甾族化合物、甲狀腺激素、酞激素）、藥物及微生物等。

作為免疫分析法的一種，F(xiàn)IA同樣存在兩種模式，即競爭型和夾心型。其中競爭型（以標(biāo)記抗原的競爭型為例）的測定原理是基于未標(biāo)記的抗原（Ag）和標(biāo)記抗原（Ag-L）競爭結(jié)合有限的抗體（Ab）而實現(xiàn)的免疫分析法。檢測時，Ab和Ag-L的濃度是固定的。當(dāng)未標(biāo)記的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后，Ag和Ab的結(jié)合使得Ag-L與Ab的免疫復(fù)合物的量減少。樣品中存在的Ag越多，Ab結(jié)合的Ag-L便越少，從Ab-Ag-L免疫復(fù)合物的減少或游離Ag-L的增加，可以定量測定出樣品中待測抗原的含量。其反應(yīng)過程如下：Ag+Ag-L+Ab≒（Ag：Ab）+（Ag-L：Ab）

對夾心型免疫分析來說，其反應(yīng)原理是在免疫反應(yīng)的載體上固定過量的Ab，然后加入一定量的Ag，免疫反應(yīng)后，再加入過量的標(biāo)記抗體（Ab-L），以形成“三明治”式夾心免疫復(fù)合物。樣品中存在的Ag越多，結(jié)合的Ab-L也越多，夾心免疫復(fù)合物的標(biāo)記熒光信號就越強(qiáng)。反應(yīng)過程如下：Ab+Ag≒Ab：Ag≒Ab：Ag：Ab-L。